羊抗(kang)兔(tu)IgG：免(mian)疫檢測的“精準橋(qiao)梁”

　　羊抗(kang)兔(tu)IgG作(zuo)為壹類高(gao)度特異性(xing)的(de)二(er)抗(kang)，憑借(jie)其對(dui)兔(tu)源(yuan)壹抗(kang)的高(gao)效(xiao)結(jie)合(he)能力(li)，成(cheng)為生(sheng)命(ming)科學(xue)研(yan)究、醫(yi)學檢測及工業(ye)質(zhi)控(kong)領域的(de)“關(guan)鍵工(gong)具(ju)”，如(ru)同連(lian)接(jie)抗(kang)原與(yu)檢測信號(hao)的(de)“精準橋(qiao)梁”，在(zai)多(duo)場(chang)景(jing)中(zhong)發(fa)揮(hui)不可替(ti)代的作用(yong)。以下(xia)結(jie)合(he)核心應用(yong)場(chang)景(jing)與(yu)標準化使(shi)用(yong)方法(fa)，為科(ke)研(yan)及技術(shu)人(ren)員(yuan)提(ti)供實操(cao)參考。

　　核心應用(yong)場(chang)景(jing)

　　1.免(mian)疫印跡(ji)（WB）：作(zuo)為(wei)WB實(shi)驗的核(he)心二(er)抗(kang)，可與(yu)兔(tu)源(yuan)壹抗(kang)特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)，通過酶(mei)促反應或熒光信號(hao)放(fang)大，實(shi)現(xian)目(mu)的(de)蛋白的定(ding)性(xing)與(yu)半(ban)定(ding)量分(fen)析，廣泛(fan)應用(yong)於(yu)蛋白表達量檢測、抗(kang)體特(te)異性(xing)驗證等(deng)基礎(chu)研(yan)究及藥物研(yan)發(fa)領域。

　　2.酶(mei)聯(lian)免疫吸(xi)附試(shi)驗（ELISA）：在間(jian)接(jie)ELISA、雙抗(kang)體夾(jia)心法(fa)中(zhong)擔任(ren)信號(hao)傳導角色，結(jie)合(he)HRP、AP等標記(ji)物後(hou)，通(tong)過底(di)物顯色反應，實現(xian)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體的(de)高(gao)靈(ling)敏(min)度檢測，適用(yong)於(yu)傳染病篩查、自身抗(kang)體檢測、食品安(an)全(quan)殘留檢測等場(chang)景(jing)。

　　3.免(mian)疫組(zu)織化(hua)學(xue)（IHC）/免疫細(xi)胞(bao)化學(xue)（ICC）：用(yong)於(yu)組(zu)織切片(pian)或細(xi)胞(bao)樣(yang)本中(zhong)靶標分(fen)子的定(ding)位(wei)分(fen)析，通過熒光素(su)或酶(mei)標記(ji)的(de)羊抗(kang)兔(tu)IgG，清(qing)晰呈現抗(kang)原在(zai)細胞(bao)內(nei)或(huo)組(zu)織中(zhong)的分(fen)布特(te)征(zheng)，為(wei)病理(li)診(zhen)斷、細胞(bao)生(sheng)物學(xue)研(yan)究提供直(zhi)觀(guan)依(yi)據(ju)。

　　4.流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)（FCM）：標記(ji)熒光素(su)的羊抗(kang)兔(tu)IgG可與(yu)兔(tu)源(yuan)壹抗(kang)結(jie)合(he)，通過流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)儀快(kuai)速(su)分(fen)析細胞(bao)群(qun)體中(zhong)靶標分(fen)子的表達水平(ping)，適用(yong)於(yu)免疫細(xi)胞(bao)亞(ya)群(qun)分(fen)析、細胞(bao)雕(diao)亡檢測等免疫相(xiang)關(guan)研(yan)究。

　　5.免疫沈澱（IP）：輔(fu)助兔(tu)源(yuan)壹抗(kang)特異(yi)性(xing)捕(bu)獲(huo)靶(ba)蛋白復合(he)物，通(tong)過羊抗(kang)兔(tu)IgG偶(ou)聯(lian)的瓊脂(zhi)糖/磁(ci)珠(zhu)，實現靶(ba)蛋白的富集(ji)與(yu)純化(hua)，為蛋白相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)研(yan)究提供關(guan)鍵支持。
 

　　標準化使(shi)用(yong)方法(fa)

　　1.樣(yang)本預(yu)處(chu)理(li)：根據(ju)實(shi)驗類型制備樣(yang)本，WB需(xu)提(ti)取(qu)蛋白並(bing)進(jin)行SDS-PAGE電(dian)泳轉(zhuan)膜(mo)；ELISA需(xu)包被抗(kang)原/抗(kang)體並(bing)封(feng)閉非特異性(xing)位(wei)點(dian)；IHC/ICC需(xu)對(dui)組(zu)織切片(pian)進行(xing)脫蠟、抗(kang)原修(xiu)復及封閉。

　　2.壹抗(kang)孵育(yu)：將兔(tu)源(yuan)壹抗(kang)按說明書(shu)比例(li)稀(xi)釋(shi)，與(yu)樣(yang)本在(zai)4℃孵(fu)育(yu)過夜或(huo)室(shi)溫孵(fu)育(yu)1-2小(xiao)時(shi)，確(que)保(bao)壹(yi)抗(kang)與靶(ba)標充(chong)分(fen)結(jie)合(he)，孵育(yu)後(hou)用(yong)PBST/TBST緩沖(chong)液洗滌3次(ci)，去(qu)除(chu)未結(jie)合(he)的遊(you)離(li)壹抗(kang)。

　　3.二(er)抗(kang)孵育(yu)：將羊抗(kang)兔(tu)IgG（按(an)標記(ji)類型選(xuan)擇酶(mei)標、熒光標等(deng)）以(yi)1:5000-1:20000比例(li)稀(xi)釋(shi)，加入樣(yang)本中(zhong)室(shi)溫孵(fu)育(yu)30-60分(fen)鐘，避免(mian)孵育(yu)時(shi)間(jian)過長導致(zhi)非特(te)異(yi)性(xing)結(jie)合(he)，孵育(yu)後(hou)同樣(yang)洗滌3次(ci)。

　　4.信號(hao)檢測：WB通過ECL化(hua)學發(fa)光底(di)物顯影(ying)，或DAB顯色；ELISA通過酶(mei)標儀(yi)讀(du)取(qu)吸光度值；IHC/ICC通(tong)過熒光顯微鏡(jing)或普(pu)通(tong)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)成(cheng)像；FCM通(tong)過流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)儀采(cai)集(ji)熒光信號(hao)並(bing)分(fen)析數據(ju)。

　　5.註(zhu)意事(shi)項(xiang)：嚴格控(kong)制二(er)抗(kang)稀(xi)釋(shi)比(bi)例(li)，避(bi)免(mian)濃度過高(gao)引(yin)發(fa)背(bei)景(jing)汙(wu)染；全(quan)程(cheng)保持(chi)樣(yang)本濕(shi)潤(run)，防止(zhi)幹(gan)燥(zao)影(ying)響結(jie)合(he)效果(guo)；不(bu)同標記(ji)的(de)二(er)抗(kang)需(xu)匹(pi)配對(dui)應的檢測體系，確保(bao)信號(hao)穩(wen)定(ding)。

　　羊抗(kang)兔(tu)IgG的(de)應用(yong)核心在(zai)於(yu)“特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)”與“信號(hao)放(fang)大”，通(tong)過規(gui)範(fan)的操(cao)作流(liu)程(cheng)可較大化(hua)其(qi)檢測靈(ling)敏(min)度與準確性(xing)，為(wei)科(ke)研(yan)探索與(yu)臨(lin)床(chuang)檢測提供可靠(kao)的技術(shu)支撐。