制(zhi)備(bei)HCG抗(kang)體常(chang)用(yong)的(de)技(ji)術有(you)哪(na)些特點？

　　制(zhi)備(bei)HCG抗(kang)體常(chang)用(yong)的(de)技(ji)術主(zhu)要包括單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體制(zhi)備(bei)技(ji)術和多克(ke)隆(long)抗(kang)體制(zhi)備(bei)技(ji)術，其中單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體制(zhi)備(bei)技(ji)術更(geng)為(wei)常(chang)用(yong)且(qie)關鍵，其特點可從(cong)以下方面(mian)闡述(shu)：

　　壹(yi)、單克(ke)隆(long)抗(kang)體制(zhi)備(bei)技(ji)術的(de)特點

　　1.特異性強：單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體僅識(shi)別HCG的(de)單壹(yi)表位(wei)，尤(you)其是(shi)β-HCG，與LH等(deng)類(lei)似(si)激素(su)的(de)交叉(cha)反(fan)應極(ji)低，優(you)質單克(ke)隆(long)抗(kang)體對(dui)β-HCG的(de)特異性可超(chao)過(guo)99%，與LH的(de)交叉(cha)反(fan)應率(lv)低於0.1%，有(you)效避免妊(ren)娠(shen)檢測中的(de)假陽性問(wen)題(ti)。

　　2.均(jun)壹(yi)性高：單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體由單壹(yi)B細(xi)胞克(ke)隆(long)產生，批(pi)次(ci)間差(cha)異(yi)小，確保實驗(yan)結(jie)果的(de)重(zhong)復(fu)性和穩(wen)定(ding)性。

　　3.親和力(li)強(qiang)：單克(ke)隆(long)抗(kang)體與HCG的(de)結(jie)合力強，結(jie)合常(chang)數(shu)（KD）通(tong)常(chang)在(zai)10⁻⁹至(zhi)10⁻¹¹mol/L範(fan)圍內(nei)，適(shi)用(yong)於低濃度HCG的(de)檢測。

　　4.制(zhi)備(bei)周期可控(kong)：雖然單克(ke)隆(long)抗(kang)體制(zhi)備(bei)周期較(jiao)長(chang)（約(yue)2-3個(ge)月(yue)），但(dan)通過標準(zhun)化(hua)流(liu)程可確保抗體質量的(de)穩定(ding)性。

　　二、單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體制(zhi)備(bei)流(liu)程的(de)關鍵(jian)特點

　　1.免疫原(yuan)選(xuan)擇：以重(zhong)組β-HCG或(huo)HCG全長(chang)為(wei)免疫(yi)原(yuan)，通過(guo)CHO細(xi)胞表達確保正(zheng)確折(zhe)疊和糖基化(hua)修飾，使免疫(yi)原(yuan)與天然HCG結(jie)構壹(yi)致(zhi)，減少交叉(cha)反(fan)應。

　　2.動物免(mian)疫：將(jiang)重(zhong)組β-HCG與佐(zuo)劑(ji)混合後(hou)，通過腹腔(qiang)註(zhu)射免疫Balb/c小鼠（初(chu)次免(mian)疫+3次加(jia)強(qiang)免(mian)疫(yi)），通(tong)過ELISA監測血清抗體(ti)效價(jia)，當(dang)效價(jia)超(chao)過(guo)1:10⁵時進行細(xi)胞融(rong)合。

　　3.細(xi)胞融(rong)合與篩選(xuan)：取小鼠脾細(xi)胞與骨(gu)髓瘤細(xi)胞（如SP2/0）融(rong)合，使用(yong)HAT培(pei)養(yang)基篩(shai)選(xuan)雜(za)交瘤(liu)細(xi)胞。通過ELISA篩選(xuan)能結(jie)合HCG的(de)陽性克(ke)隆(long)，並(bing)排除與LH、FSH等(deng)激素(su)發生交叉(cha)反(fan)應的(de)非特異性克(ke)隆(long)。

　　4.克(ke)隆(long)化(hua)與穩定(ding)性驗(yan)證(zheng)：采用(yong)有(you)限稀(xi)釋法(fa)進行2-3輪(lun)克(ke)隆(long)化(hua)培(pei)養(yang)，獲得穩(wen)定(ding)分泌(mi)特異性抗體(ti)的(de)單克(ke)隆(long)細(xi)胞株。通過長(chang)期傳代(dai)培(pei)養(yang)驗(yan)證(zheng)細(xi)胞株的(de)穩定(ding)性。

　　三、HCG抗(kang)體生產與純化(hua)的(de)特點

　　1.體外培(pei)養(yang)規(gui)模(mo)化(hua)：雜(za)交瘤(liu)細(xi)胞在(zai)無血清(qing)培(pei)養(yang)基中(zhong)大(da)規(gui)模(mo)培(pei)養(yang)，上清液經(jing)Protein A親(qin)和層(ceng)析(xi)純(chun)化(hua)，純度(du)超(chao)過(guo)95%。

　　2.體內(nei)制(zhi)備(bei)輔助(zhu)：通過小鼠腹(fu)腔(qiang)註(zhu)射雜(za)交瘤(liu)細(xi)胞制(zhi)備(bei)腹(fu)水(shui)，經純化(hua)後(hou)獲得高純(chun)度(du)抗(kang)體。

　　3.質量驗(yan)證(zheng)嚴(yan)格：最終(zhong)抗體(ti)通(tong)過(guo)SDS-PAGE驗(yan)證(zheng)純(chun)度(du)，ELISA驗(yan)證(zheng)活(huo)性，確保符合臨(lin)床和科(ke)研(yan)需(xu)求(qiu)。

　　四(si)、HCG抗體(ti)性能指標(biao)的(de)特點

　　1.靈敏度(du)高：標(biao)記(ji)後(hou)檢測下限可達(da)0.1 mIU/mL，適(shi)用(yong)於早孕檢測（此時HCG水(shui)平較(jiao)低）。

　　2.穩(wen)定(ding)性強：抗(kang)體在(zai)-20℃條件(jian)下儲存可穩(wen)定(ding)2年(nian)以上，4℃短期(qi)保存（1個(ge)月(yue)）活(huo)性無明顯(xian)下(xia)降。